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找出導致精子制動和死亡的原因

編輯:qiujingwen | 出處: 網易親子綜合

  許多不孕不育癥的原因都是在男方的身上。而因為精子的問題造成不孕不育是其中常見的病因。

  抗精子抗體就是精子的一個“毒物”。他讓精子的質量變差,導致精子不能和卵子結合,孕育出生命。

  抗精子抗體與精子結合后,在補體參與下,可導致精子制動和死亡,利用臺盼藍或伊紅Y 等染料使死精子染色,間接驗證血清或分泌液中是否有制動精子的抗體存在。

  一、臺盼藍染色法

  【準備】

  1、待檢血清的分離和滅活補體。

  2、AB血型人血清(補體)制備。

  3、2%臺盼藍液配制(用蒸餾水)。

  4、臺盼藍-生理鹽水溶液配制:取適量生理鹽水,加等體積2%臺盼藍水溶液,混勻即可。


找出導致精子制動和死亡的原因

  5、配制0.01 mol/L,pH 7.4 PBS溶液。

  【方法】

  1、取正常新鮮精液[精子濃度為(40~ 100)×106/mL]用pH7.4 PBS作1∶10稀釋,以500r/min 30min離心洗滌一次,棄去上清,沉渣用PBS調整精子濃度為100×106/mL 的精子懸液。

  2、在小試管內加入1滴待檢血清,1滴精子懸液和 2滴補體血清。置37℃ 孵育,并于30min、60min分別追加2滴補體血清,直至90min后加入 1滴臺盼藍生理鹽水溶液,繼續孵育 60min,取出小試管,以500r/min,30min離心,棄去上清,將沉渣涂片,待干燥后鏡下觀察。以陰性血清作對照組,以同樣條件和方法處理

  3、計數:對照組:記錄數至100個無染色精子(活精子)時所需的總精子數(含100個無染色精子加一定數量染色的死精子)。實驗組:記錄對照組相應的總精子數,把其中所含的無染色精子(活精子)數作X。將100-X所得的數目,即為被檢血致死的精子數,這個數目稱為精子毒性指數(STI)。

  【判斷】

  STI>25時,P≤0.01,判為陽性。STI在 15~ 20之間,判為可疑。STI<15時,判為陰性。本法所得陽性率與精子制動試驗的陽性率較為一致。

  

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